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細胞治療產(chǎn)品研究與評價技術(shù)指導原則
（試行）
一、前言
近年來，隨著干細胞治療、免疫細胞治療和基因編輯等基礎(chǔ)理論、技術(shù)手段和臨床醫(yī)療探索研究的不斷發(fā)展，細胞治療產(chǎn)品為一些嚴重及難治性疾病提供了新的治療思路與方法。為規(guī)范和指導這類產(chǎn)品按照藥品管理規(guī)范進行研究、開發(fā)與評價，制定本指導原則。由于細胞治療類產(chǎn)品技術(shù)發(fā)展迅速且產(chǎn)品差異性較大，本原則主要是基于目前的認知，提出涉及細胞治療產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的一般技術(shù)要求。隨著技術(shù)的發(fā)展、認知的提升和經(jīng)驗的積累，將逐步完善、細化與修訂不同細胞類別產(chǎn)品的具體技術(shù)要求。由于本指導原則涵蓋多種細胞類型的產(chǎn)品，技術(shù)要求的適用性還應(yīng)當采用具體問題具體分析的原則。
二、范圍
本指導原則所述的細胞治療產(chǎn)品是指用于治療人的疾病，來源、操作和臨床試驗過程符合倫理要求，按照藥品管理相關(guān)法規(guī)進行研發(fā)和注冊申報的人體來源的活細胞產(chǎn)品。本指導原則不適用于輸血用的血液成分，已有規(guī)定的、未經(jīng)體外處理的造血干細胞移植，生殖相關(guān)細胞，以及由細胞組成的組織、器官類產(chǎn)品等。
三、風險控制
由于細胞治療產(chǎn)品種類多、差異大、性質(zhì)復雜多變、研究進展快、技術(shù)更新迅速、風險程度不同，因此，對于不同類型產(chǎn)品，可基于風險特征和專項控制措施，采用適合其產(chǎn)品的特有技術(shù)。
細胞治療產(chǎn)品的風險很大程度上取決于細胞的來源、類型、性質(zhì)、功能、生產(chǎn)工藝、非細胞成分、非目的細胞群體、全生產(chǎn)過程中的污染和/或交叉污染的防控，以及具體治療途徑及用途等。不同細胞治療產(chǎn)品的制備及使用過程可能會給患者帶來不同程度的風險。細胞治療產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)不同的風險制訂相應(yīng)的風險控制方案。從細胞治療產(chǎn)品研發(fā)初始，應(yīng)根據(jù)已有認識及其預(yù)期用途進行全面分析，并應(yīng)在整個產(chǎn)品生命周期內(nèi)不斷地收集和更新數(shù)據(jù)，明確和防范風險。
在評估產(chǎn)品的整體風險時，應(yīng)考慮各種因素對產(chǎn)品風險的影響，比如細胞的來源，細胞的操作程度，細胞的增殖、分化、遷移能力，細胞體外暴露于特定培養(yǎng)物質(zhì)時間、細胞培養(yǎng)時間、細胞存活情況和細胞代次，非細胞成分的毒性作用，物理性及化學性處理或基因修飾/改造對細胞特性的改變程度，細胞和生物活性分子或結(jié)構(gòu)材料組成的組合產(chǎn)品，激活免疫應(yīng)答的能力，免疫識別的交叉反應(yīng)，使用方式以及對受者的預(yù)處理，類似產(chǎn)品的經(jīng)驗或相關(guān)臨床數(shù)據(jù)的可用性等多方面因素。
在細胞治療產(chǎn)品的研發(fā)中，應(yīng)不斷綜合各種風險因素進行分析評估，特別是應(yīng)將綜合風險分析結(jié)果用于：確定與產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性相關(guān)的風險因素；確定在非臨床和臨床應(yīng)用中所需數(shù)據(jù)的范圍和重點；確定風險最小化措施的過程等。
細胞治療產(chǎn)品中的細胞來源、獲取和操作過程應(yīng)當符合倫理。生產(chǎn)者應(yīng)建立“知情與保密”管理體系，一方面讓供者充分了解細胞的用途和使用情況，另一方面讓供者的個人信息得到充分的保護。對于制備過程中不合格及臨床試驗剩余的細胞治療產(chǎn)品或供體細胞，必須采用妥善、合法并符合倫理和生物環(huán)境安全性相關(guān)要求的處理方式。
細胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)者應(yīng)建立產(chǎn)品可追溯的管理體系，以確保產(chǎn)品從供者到受者全過程的可追溯性。需列出供者—產(chǎn)品—受者鏈，或自體產(chǎn)品—受者鏈，需規(guī)范和監(jiān)控生產(chǎn)操作過程，嚴格防控不同供者樣品（或不同批次樣品）的混淆。
四、藥學研究
（一）一般原則
由于細胞本身具備體內(nèi)生存、自主增殖或/和分化的能力，其藥學研究和質(zhì)量控制應(yīng)充分考慮以上基本特征，同時細胞治療產(chǎn)品應(yīng)符合藥品質(zhì)量管理的一般要求，臨床用樣品的生產(chǎn)全過程應(yīng)當符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的基本原則和相關(guān)要求。生產(chǎn)過程中應(yīng)特別關(guān)注人員、環(huán)境、設(shè)備等要求。細胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)應(yīng)建立全過程控制體系，生產(chǎn)工藝應(yīng)經(jīng)過嚴格的工藝驗證并建立清晰的關(guān)鍵控制點；應(yīng)嚴格控制生產(chǎn)用材料的質(zhì)量并建立生產(chǎn)線清場的操作規(guī)范，避免生產(chǎn)用原材料和生產(chǎn)操作過程中可能引入的外源性污染或交叉污染；應(yīng)制訂有效的隔離措施，防止不同供者來源制品或不同批次產(chǎn)品的混淆。
研究者需根據(jù)產(chǎn)品自身的特點綜合評估供者細胞應(yīng)用的合理性。一般情況下，采集前應(yīng)對供者進行篩查，包括健康狀況的全面檢查（如一般信息、既往病史和家族性遺傳病等）、病原微生物的感染篩查和在危險疫區(qū)停留情況的調(diào)查等。
（二）生產(chǎn)用材料
生產(chǎn)用材料是指用于制備細胞治療產(chǎn)品的物質(zhì)或材料，包括細胞、培養(yǎng)基、細胞因子、各種添加成分、凍存液、基因修飾/改造用物質(zhì)和輔料等。生產(chǎn)用材料直接關(guān)系到產(chǎn)品的質(zhì)量，因此研究者應(yīng)建立良好、規(guī)范的生產(chǎn)用材料的質(zhì)量管理體系，包括使用風險的評估、對關(guān)鍵生產(chǎn)用材料的供應(yīng)商的審計和制訂質(zhì)量放行檢測機制等工作程序。
1.細胞
1.1供者細胞
供者細胞來源應(yīng)符合國家相關(guān)的法律法規(guī)和倫理的要求，供者細胞的獲取、運輸、分選、檢驗或保存等操作步驟應(yīng)經(jīng)過研究和驗證，并在此基礎(chǔ)上制訂明確的規(guī)范和要求，比如供者細胞的特征、培養(yǎng)情況、代次、生長特性、保存狀態(tài)、保存條件以及檢驗情況等。原則上，對于適合于建立細胞庫的供者細胞應(yīng)建立細胞庫進行保存和生產(chǎn)。細胞庫的層級可根據(jù)細胞自身特性、生產(chǎn)情況和臨床應(yīng)用情況綜合考慮；并應(yīng)建立細胞庫的檢驗標準，檢驗應(yīng)滿足安全性、質(zhì)量可控性和/或有效性的基本要求。
1.2生產(chǎn)過程細胞
生產(chǎn)過程細胞，如生產(chǎn)病毒用細胞，原則上應(yīng)該符合來源和歷史培養(yǎng)情況清楚、安全性風險可控、符合生產(chǎn)技術(shù)的需要和建立細胞庫管理的基本原則。
2.其他生產(chǎn)用材料
2.1原材料
生產(chǎn)用原材料的來源、組成、用途、用量和質(zhì)量控制等情況應(yīng)明確并合理。選擇原材料時應(yīng)考慮其使用的必要性、合理性和安全性，比如可能導致細胞突變或存在致敏可能性的非預(yù)期影響等，并應(yīng)開展工藝去除效果驗證和安全性風險評估，必要時對其殘留量進行放行檢測。應(yīng)盡量采用已經(jīng)獲得批準用于人體的或符合藥典標準的原材料。生物來源的原材料，應(yīng)進行全面的外源因子檢測，并應(yīng)考慮到技術(shù)發(fā)展對新型外源因子的認知。自體使用產(chǎn)品應(yīng)嚴格防止可能存在的外源因子傳播的風險。
細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過程中使用的篩查試劑盒、分選試劑或材料、細胞分離或活化用抗體或磁珠、培養(yǎng)基、培養(yǎng)過程的添加物和與產(chǎn)品或中間樣品接觸的生產(chǎn)設(shè)備或材料等應(yīng)經(jīng)過嚴格的篩選和適用性的評估，應(yīng)關(guān)注感染性病原微生物和免疫原性等安全性風險，建議盡量使用經(jīng)監(jiān)管當局批準的產(chǎn)品，否則建議使用適合產(chǎn)品的高質(zhì)量級別的產(chǎn)品。細胞培養(yǎng)過程中，應(yīng)盡量避免使用動物或人來源的物質(zhì)，比如應(yīng)盡量避免血清的使用，若必須使用血清，需要提供相關(guān)的研究資料說明使用的必要性和合理性；嚴禁使用疫病流行區(qū)來源的動物血清；不得使用未經(jīng)過安全性驗證的血清。
對于需要經(jīng)過基因修飾/改造的產(chǎn)品，應(yīng)明確基因修飾/改造過程中采用的基因物質(zhì)材料的來源、組成和質(zhì)量控制情況，具體要求可參考相關(guān)的技術(shù)指導原則和/或文件。由于基因修飾/改造用物質(zhì)可作為終產(chǎn)品的物質(zhì)組成，因此應(yīng)符合藥品的生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范。
2.2輔料
細胞治療產(chǎn)品中輔料的使用、用量和質(zhì)量情況應(yīng)加以研究和驗證，證明其使用的必要性、安全性和合理性。宜優(yōu)選經(jīng)批準可用于人體的輔料，否則需要開展全面的研究與評估。對于新型的輔料應(yīng)開展適當?shù)姆桥R床安全性研究。
（三）制備工藝與過程控制
細胞治療產(chǎn)品的制備工藝指從供者獲得供者細胞到細胞成品輸入到受者體內(nèi)的一系列體外操作的過程。研究者應(yīng)進行工藝的研究與驗證，證明工藝的可行性和穩(wěn)健性。生產(chǎn)工藝的設(shè)計應(yīng)避免細胞發(fā)生非預(yù)期的或異常的變化，并滿足去除相關(guān)雜質(zhì)的要求；需建立規(guī)范的工藝操作步驟、工藝控制參數(shù)、內(nèi)控指標和廢棄標準，對生產(chǎn)的全過程進行監(jiān)控。研究者應(yīng)不斷優(yōu)化制備工藝，減少物理、化學或生物學作用對細胞的特性產(chǎn)生非預(yù)期的影響，以及減少雜質(zhì)的引入，比如蛋白酶、核酸酶、選擇性的抑制劑的使用等。建議盡量采用連續(xù)的制備工藝，如果生產(chǎn)過程中有不連續(xù)生產(chǎn)的情況時，應(yīng)對細胞的保存條件和時長進行研究與驗證。建議盡量采用封閉的或半封閉的制備工藝，以減少污染和交叉污染的風險。
生產(chǎn)工藝全過程的監(jiān)控包括生產(chǎn)工藝參數(shù)的監(jiān)測和過程控制指標的達成等。研究者應(yīng)在對整體工藝的理解和對生產(chǎn)產(chǎn)品的累積經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，明確過程控制中關(guān)鍵的生產(chǎn)步驟、制訂敏感參數(shù)的限定范圍，以避免工藝發(fā)生偏移。必要時，還可以對制備過程中的細胞進行質(zhì)量監(jiān)控，過程中的質(zhì)量監(jiān)控與細胞放行檢測相互結(jié)合與互補，以達到對整體工藝和產(chǎn)品質(zhì)量的控制。例如，細胞在體外需要進行基因修飾/改造時，需要關(guān)注基因物質(zhì)的轉(zhuǎn)導效率、基因進入細胞后的整合情況、細胞的表型和基因型、目的基因的遺傳穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)導用基因物質(zhì)的殘留量，以及病毒復制能力回復突變等；細胞在體外進行誘導分化時，需要關(guān)注細胞的分化情況、細胞生長特性（如惡性轉(zhuǎn)化等）、細胞的表型和/或基因型、誘導物質(zhì)的殘留情況等。
產(chǎn)品的劑型、制劑處方和處方工藝，應(yīng)根據(jù)臨床用藥要求和產(chǎn)品自身的穩(wěn)定性情況而定。有些細胞治療產(chǎn)品在給藥前需經(jīng)過產(chǎn)品成分物理狀態(tài)的轉(zhuǎn)變、容器的轉(zhuǎn)換、過濾與清洗、與其他結(jié)構(gòu)材料的聯(lián)合，以及調(diào)整給藥劑量等操作步驟，這些工藝步驟的確定也應(yīng)該經(jīng)過研究與驗證，并在實際應(yīng)用中嚴格執(zhí)行。
（四）質(zhì)量研究與質(zhì)量控制
1.質(zhì)量研究
細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量研究應(yīng)選擇有代表性的生產(chǎn)批次和合適的生產(chǎn)階段樣品（如初始分離的細胞、制備過程中細胞或成品等）進行研究。質(zhì)量研究應(yīng)涵蓋細胞特性分析、功能性分析、純度分析和安全性分析等方面，并且根據(jù)產(chǎn)品的自身特性可再增加其他相關(guān)的研究項目。
細胞特性研究應(yīng)根據(jù)不同類型細胞的特征進行研究，如細胞鑒定（基因型、表型等）、分化潛能研究、表面標志物的表達、生物學活性、對外源性刺激的應(yīng)答和表達產(chǎn)物的定性與定量的研究等方面。對于預(yù)期產(chǎn)品為多種不同類型或不同基因型/表型細胞所組成的混合物時，建議對細胞的混合特性進行鑒定研究和定量質(zhì)控。
功能性分析方面，應(yīng)針對細胞的性質(zhì)、特點和預(yù)期用途等，建立功能性研究的方法，并用于研究與分析。研究中應(yīng)考慮到產(chǎn)品的作用機制（比如細胞直接作用、細胞分泌因子作用或是其他），結(jié)合臨床應(yīng)用的適應(yīng)癥或其他可替代的指標建立合理、有效的生物學效力檢測的方法。
細胞純度方面，建議檢測活細胞百分含量、亞細胞類別百分含量等；如果細胞進行了基因修飾/改造或分化誘導，建議檢測功能性細胞的比率。建議根據(jù)臨床應(yīng)用的風險情況考慮對其他非目的細胞群體進行定性和定量的研究與/或質(zhì)量控制。
安全性相關(guān)的研究應(yīng)根據(jù)細胞來源和制備工藝過程的特點考慮，可選擇針對外源性因子、細胞惡性轉(zhuǎn)化的可能性、成瘤性和致瘤性、相關(guān)雜質(zhì)、病毒載體回復突變等方面開展研究。相關(guān)雜質(zhì)研究中應(yīng)包括工藝中引入的雜質(zhì)（如蛋白酶、分化誘導試劑、病毒載體、微珠等）和產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)（如細胞非預(yù)期表達的產(chǎn)物、死細胞殘余和其他可能的生物降解產(chǎn)物等）。
2.質(zhì)量控制
研究者需建立細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制策略。建議采用中間樣品的質(zhì)量檢驗和終產(chǎn)品放行檢驗相結(jié)合的機制。檢定項目應(yīng)當建立在產(chǎn)品質(zhì)量研究以及對生產(chǎn)工藝和生產(chǎn)過程充分理解的基礎(chǔ)之上，同時兼顧產(chǎn)品的特性和當下的科學認知與共識。隨著研究的不斷深入（如從臨床前階段進行至臨床階段），工藝相關(guān)信息應(yīng)逐漸獲得累積，檢驗方法應(yīng)逐步完善，以適應(yīng)各階段的質(zhì)量控制要求，建議確證性臨床試驗用樣品的質(zhì)量控制與商業(yè)化生產(chǎn)時的質(zhì)控要求保持一致。質(zhì)量控制一般應(yīng)考慮鑒別、生物學效力、純度、雜質(zhì)、細胞數(shù)量（活細胞數(shù)、功能細胞數(shù)等）和一般檢測（如無菌、支原體、內(nèi)毒素、外觀、除細胞之外的其他外源性異物等）等。驗收標準的制訂應(yīng)以臨床前研究批次、臨床研究批次和驗證批次中檢測獲得的數(shù)據(jù)，以及其他相關(guān)數(shù)據(jù)（如經(jīng)驗、文獻報道和穩(wěn)定性研究等）確定。
當放行檢驗受到時間限制時，可考慮加強工藝過程中的樣品質(zhì)量監(jiān)控，將過程控制與放行檢驗相結(jié)合，通過過程控制簡化放行檢驗。以上操作應(yīng)經(jīng)過研究與驗證，并附有相應(yīng)的操作規(guī)范。建議盡量在產(chǎn)品臨床應(yīng)用前完成全部放行檢驗，當有些放行檢驗結(jié)果可能后置時，應(yīng)對可能出現(xiàn)的非預(yù)期檢驗結(jié)果制訂處置方案。為對產(chǎn)品進行回顧性分析或進一步分析，建議研究者根據(jù)產(chǎn)品自身特點，并參照《藥品生產(chǎn)管理規(guī)范》中的要求進行留樣備查。
一些細胞治療產(chǎn)品在給藥前還需經(jīng)過一系列操作步驟，研究開發(fā)時應(yīng)開展模擬給藥過程的相關(guān)研究。如果該操作在醫(yī)療機構(gòu)開展，產(chǎn)品生產(chǎn)者應(yīng)明確操作步驟和注意事項，以指導臨床醫(yī)護工作者正確操作使用。建議在給藥前完成操作后對最終產(chǎn)品進行質(zhì)量核準，如細胞形態(tài)、活細胞數(shù)及比率、顏色、除細胞之外的其他外源性異物等，以及操作步驟的復核和標簽核對等。
放行檢驗用方法應(yīng)經(jīng)過研究與驗證，特別是對于建立的新方法應(yīng)進行全面的驗證，對于藥典中收錄的方法應(yīng)進行適用性的驗證。對于有效期短和樣本量小的產(chǎn)品，可采用快速、微量的新型檢測方法。研究者應(yīng)對新型檢驗方法與傳統(tǒng)檢測方法進行比較和評估，必要時，在產(chǎn)品放行檢驗時可以采用兩種檢驗方法進行相互驗證。
（五）穩(wěn)定性研究
細胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)建議采用連續(xù)的工藝，對于生產(chǎn)過程中需要臨時保存的樣品應(yīng)進行穩(wěn)定性研究，以支持其保存條件與存放期。細胞治療產(chǎn)品穩(wěn)定性研究的基本原則可參照一般生物制品穩(wěn)定性研究的要求，并根據(jù)產(chǎn)品自身的特點、臨床用藥的需求，以及保存、包裝和運輸?shù)那闆r設(shè)計合理的研究方案。應(yīng)采用具有代表性的細胞樣本和存儲條件開展研究。其中，需要特別關(guān)注細胞治療產(chǎn)品的運輸穩(wěn)定性研究和使用過程中的穩(wěn)定性研究等，應(yīng)開展研究證明在擬定的存儲條件下，細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量不會受到運輸、使用中或其他外界條件的影響。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品自身的特點和存儲條件等方面，合理地設(shè)計穩(wěn)定性考察的項目和檢測指標，例如，冷凍儲存的樣品或產(chǎn)品一般應(yīng)模擬使用情形（如細胞復蘇過程）開展必要的凍融研究?？疾祉椖拷ㄗh涵蓋生物學效力、細胞純度、細胞特性、活細胞數(shù)及比率、功能細胞數(shù)和安全性相關(guān)的內(nèi)容等。
（六）容器和密閉系統(tǒng)
為避免由于存儲而導致的產(chǎn)品質(zhì)量發(fā)生非預(yù)期變化，研究者應(yīng)對細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的樣品和/或成品保存用的包裝容器和密閉系統(tǒng)進行安全性評估和相容性研究，以說明其使用的合理性，例如密封性研究、冷凍儲存適應(yīng)性研究等。
細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)過程中可能涉及樣品與容器短暫直接接觸的步驟，如采集的組織或細胞、制備過程中的細胞、成品回輸?shù)炔襟E，研究者應(yīng)對使用的容器進行安全性評估或接觸的相容性研究等。
對于運輸用的次級包裝容器（非直接接觸細胞）或材料也應(yīng)經(jīng)過驗證，如對其遮光性、密封性和抗擊機械壓力等方面進行研究和驗證。
五、非臨床研究
（一）一般原則
1.研究評價內(nèi)容
由于細胞治療產(chǎn)品的物質(zhì)組成及作用機制與小分子藥物、大分子生物藥物不同，所以傳統(tǒng)、標準的非臨床研究評價方法可能不完全適用于細胞治療產(chǎn)品。細胞治療產(chǎn)品的非臨床研究評價內(nèi)容取決于細胞類型及臨床用途，與細胞來源、種類、生產(chǎn)過程、基因修飾/改造、處方中非細胞成分等因素密切相關(guān)，還與研發(fā)計劃及相應(yīng)的臨床試驗方案有關(guān)。由于細胞治療產(chǎn)品種類繁多，不同產(chǎn)品其治療原理、體內(nèi)生物學行為、臨床應(yīng)用存在差別和不確定性，因此，對不同產(chǎn)品的研究評價應(yīng)遵循“具體情況具體分析”的原則；同時，人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）頒布的《生物技術(shù)藥品的非臨床安全性評價指南》（S6）可為細胞治療產(chǎn)品的非臨床研究評價提供參考。
2.受試物要求
非臨床研究評價試驗應(yīng)盡可能使用擬用于臨床試驗的細胞治療產(chǎn)品；用于進行非臨床試驗的受試物，其生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制應(yīng)與擬用于臨床試驗的受試物一致（如果不一致應(yīng)給予說明，并評估其對預(yù)測人體反應(yīng)的影響）。
（1）人源的細胞治療受試物參考本指導原則的藥學要求；
（2）如果由于相關(guān)動物選擇的限制，可考慮使用動物源
替代品進行非臨床研究評價；動物源替代品應(yīng)與人源的細胞治療受試物的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量標準盡可能相似，并提供必要的比較數(shù)據(jù)以確認替代品的質(zhì)量屬性?？煽紤]如下對比：
①組織或樣本獲取的程序；
②細胞識別、分離、擴增以及體外培養(yǎng)程序；
③細胞生長動力學參數(shù)（例如細胞倍增時間、細胞生長曲線、細胞增殖高峰時間）；
④表型和功能特性（比如生長因子和細胞因子的分泌，細胞群體特異性表型/基因型標志）；
⑤終產(chǎn)品配方/細胞支架種植方式（如果有）；
⑥終產(chǎn)品的儲存條件及細胞活力；
⑦動物替代細胞作用方式與終產(chǎn)品細胞作用方式的異同。
非臨床試驗受試物和臨床用樣品的異同均應(yīng)在新藥申報時予以說明。
3.動物種屬選擇
非臨床研究評價應(yīng)選擇合適種屬的動物進行試驗，所選動物對細胞治療產(chǎn)品的生物反應(yīng)與預(yù)期人體反應(yīng)接近或相似。動物模型選擇需考慮以下幾個方面：
（1）生理學和解剖學與人類具有可比性；
（2）對人體細胞產(chǎn)品或攜帶人類轉(zhuǎn)基因的細胞產(chǎn)品的免疫耐受性；
（3）臨床給藥系統(tǒng)/流程的可行性，轉(zhuǎn)運特定劑量的細胞到治療靶點的可行性；
（4）免疫缺陷動物的適用性，對產(chǎn)品進行長期安全性評估的可行性。
免疫功能正常的動物給予人源細胞時可能出現(xiàn)免疫應(yīng)答反應(yīng)，此種情況下，可考慮采用以下模型開展非臨床研究：
①給予免疫抑制劑于具有免疫能力的動物；
②遺傳性免疫缺陷動物；
③人源化動物；
④在免疫豁免部位給藥；
⑤或者以上形式的組合。
某些情況下，也可采用動物源替代品進行評價。
鑒于細胞治療產(chǎn)品的特性，如產(chǎn)品效應(yīng)持續(xù)時間長、在體內(nèi)持續(xù)存在、在細胞治療產(chǎn)品與疾病環(huán)境間復雜的作用機制、侵入性的給藥途徑等，也可考慮采用疾病動物模型進行非臨床研究。
4.給藥方式（途徑）
非臨床研究評價中，細胞治療產(chǎn)品的給藥方式應(yīng)能最大程度模擬臨床擬用給藥方式。如果在動物試驗中無法模擬臨床給藥方式，臨床前研究中需明確替代的給藥方式/方法，并闡明其科學性和合理性。
當使用特殊的給藥裝置給藥時，非臨床試驗采用的給藥裝置系統(tǒng)應(yīng)與臨床一致。
5.受試物分析
應(yīng)提供受試物分析數(shù)據(jù)。
細胞治療產(chǎn)品在給藥前可能還需經(jīng)過一系列操作步驟，在完成操作后需對受試物進行質(zhì)量檢測，檢測指標包括細胞形態(tài)、總活細胞數(shù)、細胞存活率、顏色、除細胞之外的其他外源性異物等。
（二）藥效學研究
藥效學研究應(yīng)采用可靠的方法驗證細胞治療產(chǎn)品的基本治療機理，確定生物學效應(yīng)標志物。試驗設(shè)計應(yīng)考慮細胞治療產(chǎn)品的作用機制、疾病周期長短以及給藥方式等因素，結(jié)合細胞治療產(chǎn)品的特性和存活時間。建議采用相關(guān)的體外和體內(nèi)模型完成細胞治療產(chǎn)品的藥效學研究。
（三）藥代動力學研究
藥代動力學研究應(yīng)能闡明細胞的體內(nèi)過程以及伴隨的生物學行為，應(yīng)根據(jù)細胞治療產(chǎn)品類型和特點選擇合適的動物模型，一般考慮雌雄各半。根據(jù)研究目的及檢測指標的臨床價值，建立合適的生物分析方法并對方法進行必要的驗證。藥代動力學研究要關(guān)注目標細胞在體內(nèi)的增殖、生物分子的表達和/或分泌，以及與宿主組織的相互作用；相互作用還包括細胞治療產(chǎn)品的非細胞成分（輔料成分）及分泌的生物活性分子引起的相關(guān)組織反應(yīng)。藥代動力學研究內(nèi)容包括但不僅限于以下方面：
1.細胞的分布、遷移、歸巢
應(yīng)采用一種或多種合適的細胞追蹤方法評價細胞產(chǎn)品的分布、遷移、歸巢及其存續(xù)和消亡特性，并闡述方法的科學性。細胞治療產(chǎn)品的分布及存續(xù)時間是影響細胞治療產(chǎn)品有效性和安全性的最重要因素，應(yīng)進行動態(tài)觀察，必要時觀察直至這些細胞的消失或功能喪失?？蛇x擇的技術(shù)方法有影像技術(shù)、PCR技術(shù)、免疫組化技術(shù)等，試驗設(shè)計需要考慮技術(shù)方法的適用性和優(yōu)缺點。
2.細胞分化
細胞在分布、遷移和歸巢后進一步分化為功能細胞發(fā)揮其治療作用或功能衰退；對于細胞產(chǎn)品分化的程度及其后果（功能化或去功能化、安全參數(shù)），可應(yīng)用體外方法和動物體內(nèi)方法進行定量或定性評價研究。
3.對于經(jīng)基因修飾/改造操作的人源細胞的特殊考慮
對于基因修飾/改造的細胞，除上述要求外，還需對目的基因的存在、表達、以及表達產(chǎn)物的生物學作用進行必要的研究，以體現(xiàn)基因修飾/改造的體內(nèi)生物學效應(yīng)。
（四）安全性研究評價
1.GLP遵從性要求
細胞治療產(chǎn)品的安全性研究評價應(yīng)遵從《藥物非臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》（GLP）。對于某些在非GLP狀況下開展的研究或檢測，應(yīng)予說明并評估非GLP對試驗結(jié)果可靠性、完整性及對細胞治療產(chǎn)品總體安全性評價的影響。
2.安全藥理學試驗
細胞在體內(nèi)分泌的活性物質(zhì)可能會對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的功能等產(chǎn)生影響；細胞本身分布或植入于重要器官，細胞治療產(chǎn)品的處方成分等也可能影響器官功能。因此，對于細胞治療產(chǎn)品應(yīng)考慮進行安全藥理試驗。如果在毒性試驗中發(fā)現(xiàn)有潛在風險，應(yīng)補充開展有關(guān)安全藥理試驗。
3.單次給藥毒性試驗
單次給藥毒性試驗可獲得劑量與全身和/或局部毒性之間的劑量-反應(yīng)關(guān)系，有助于了解其毒性靶器官，也可為重復給藥毒性試驗的劑量設(shè)計提供一定的參考。由于細胞治療產(chǎn)品能夠長時間地發(fā)揮功能或誘導長期效應(yīng)，因此單次給藥的觀察時間應(yīng)考慮細胞或者細胞效應(yīng)的存續(xù)時間，一般應(yīng)長于單次給藥毒性試驗常規(guī)的觀察時間。
4.重復給藥毒性試驗
試驗設(shè)計應(yīng)包含常規(guī)毒理學試驗研究的基本要素，并結(jié)合細胞治療產(chǎn)品的特殊性來設(shè)計，以期獲得盡可能多的安全性信息。
動物種屬選擇：根據(jù)產(chǎn)品的不同特性，采用能夠?qū)毎委煯a(chǎn)品產(chǎn)生生物學活性的動物種屬進行重復給藥毒性研究。一般情況下應(yīng)采用雌雄動物進行試驗。如無相關(guān)種屬可開展非臨床研究時，非相關(guān)種屬的動物試驗對評價生產(chǎn)工藝過程、全處方的安全性及非靶效應(yīng)也可能具有價值。
劑量組設(shè)計：參考“《藥物重復給藥毒性研究技術(shù)指導原則》”，需設(shè)計多個劑量水平、包含臨床擬用劑量范圍和最大可行劑量，并結(jié)合處方組成及生產(chǎn)工藝，設(shè)置合適的對照組。
觀察指標：除常規(guī)觀察指標外，需結(jié)合產(chǎn)品特點，選擇合適的觀察指標，盡可能包括形態(tài)學與功能學的評價指標，如行為學檢測、神經(jīng)功能測試、心功能評價、眼科檢查、異常/異位增生性病變（如增生、腫瘤）、生物標志物、生物活性分子的分泌、免疫反應(yīng)以及與宿主組織的相互作用等。
5.免疫原性和免疫毒性試驗
細胞治療產(chǎn)品或細胞分泌產(chǎn)物需要研究其潛在的免疫原性，免疫原性研究可參考最新版技術(shù)研究指導原則；此外，還需關(guān)注細胞治療產(chǎn)品誘導產(chǎn)生的免疫毒性。
6.致瘤性/致癌性試驗
細胞治療產(chǎn)品的致瘤性/致癌性風險取決于產(chǎn)品中不同細胞的分化狀態(tài)、生產(chǎn)過程中采用的細胞培養(yǎng)方式引起的生長動力學改變、基因修飾/改造細胞的轉(zhuǎn)基因表達（例如多種生長因子）、誘導或增強宿主體內(nèi)形成腫瘤的可能性以及目標患者人群等，需要根據(jù)以上特點進行綜合考慮。
目前，如何選擇致瘤性/致癌性研究的動物模型尚未達成科學共識。致瘤性/致癌性試驗應(yīng)采用臨床擬用產(chǎn)品進行試驗。致瘤性/致癌性試驗需確保細胞可在體內(nèi)長期存活以考察是否有潛在腫瘤形成。試驗設(shè)計需注意以下方面：（1）合適的對照組（例如陽性對照、空白對照）；（2）每組需有足夠的動物數(shù)量，使腫瘤發(fā)生率的分析滿足統(tǒng)計學要求；（3）需包含最大可行劑量；（4）受試物應(yīng)到達擬定的臨床治療部位；（5）足夠長的試驗周期。
由于免疫排斥反應(yīng)，人源細胞治療產(chǎn)品的致瘤性/致癌性試驗可考慮使用免疫缺陷的嚙齒類動物模型進行。
7.生殖毒性試驗
細胞治療產(chǎn)品的生殖和發(fā)育毒性評價主要是取決于產(chǎn)品的特性、臨床適應(yīng)癥以及臨床擬用人群，應(yīng)根據(jù)具體情況具體分析。
8.遺傳毒性試驗
對于人源的細胞治療產(chǎn)品，如果該產(chǎn)品與DNA或其他遺傳物質(zhì)存在直接的相互作用，需進行遺傳毒性試驗。
9.特殊安全性試驗
根據(jù)細胞治療產(chǎn)品的特點與臨床應(yīng)用情況，應(yīng)考慮對局部耐受性、組織兼容性及對所分泌物質(zhì)的耐受性進行評估。
10.其他毒性試驗
對于采用基因修飾/改造的細胞治療產(chǎn)品，需關(guān)注有復制能力的病毒的產(chǎn)生和插入突變，特別是致癌基因的活化等特性帶來的安全性風險。具體要求可參見相關(guān)的技術(shù)指導文件。
六、臨床研究
當細胞治療產(chǎn)品進入臨床試驗階段時，應(yīng)遵循《藥物臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》（GCP）的要求。臨床試驗的研究內(nèi)容原則上應(yīng)包括臨床安全性評價、藥代動力學研究、藥效學研究、劑量探索研究和確證性臨床試驗等。根據(jù)不同細胞治療產(chǎn)品的產(chǎn)品性質(zhì)，可酌情調(diào)整具體的試驗設(shè)計。
鑒于細胞治療產(chǎn)品特殊的生物學特性，在臨床試驗研究中，需要采取不同于其他藥物的臨床試驗整體策略。為了獲得預(yù)期治療效果，細胞治療產(chǎn)品可能需要通過特定的手術(shù)措施、給藥方法或聯(lián)合治療策略來進行給藥。因此，在臨床試驗方案設(shè)計中應(yīng)一并考慮。
細胞治療產(chǎn)品很多特有的性質(zhì)也會影響其臨床試驗的設(shè)計，包括產(chǎn)品特性、生產(chǎn)特點以及臨床前研究的結(jié)果等。
（一）受試者的保護
受試者的選擇需要考慮多方面的因素，選擇宗旨是能使研究受試者的預(yù)期風險與潛在獲益經(jīng)過慎重評估，同時能實現(xiàn)研究的科學目的。
在早期臨床試驗階段，所預(yù)期的獲益或風險存在很大的不確定性。對于預(yù)期作用持久或永久以及侵入性給藥等高風險特點的細胞治療產(chǎn)品，在試驗中應(yīng)選擇預(yù)期治療可能獲益的患者。
選擇患者作為受試者時，應(yīng)充分考慮患者疾病的嚴重程度和疾病的不同階段以及現(xiàn)有治療手段，如果不能獲得有效的治療，特別是不可治愈性疾病重度致殘和危及生命時，患者接受細胞治療臨床研究是合理的。同時應(yīng)確定并減小受試者可能承擔的風險。
在受試者的選擇中，還應(yīng)關(guān)注，如果患者將來需要通過細胞、組織或器官移植治療該或其他疾病，異體細胞治療產(chǎn)品誘導產(chǎn)生的抗體可能會影響到移植的成功率。
受試者選擇可能會影響臨床試驗的風險和獲益，應(yīng)盡可能減少風險、提高分析結(jié)果的能力，并增加對個體受試者和社會的獲益。
對受試者可能帶來的風險和獲益應(yīng)在知情同意書中給予充分表述。
（二）藥效學
即使受試的細胞治療產(chǎn)品的作用機制尚不清晰，但對其主要的作用應(yīng)有所了解。
在早期臨床試驗中，通常其主要目的是評價產(chǎn)品的安全性，常見的次要目的則是初步評估產(chǎn)品有效性，即藥效學評價。評估指標為可能提示潛在有效性的短期效應(yīng)或長期結(jié)局。這些概念驗證數(shù)據(jù)可以對后續(xù)的臨床開發(fā)提供支持。在細胞治療產(chǎn)品的活性評估中，可以包括基因表達、細胞植入、形態(tài)學變化和其他生物標志物等特殊指標，也可以包括免疫功能變化、腫瘤體積改變或各種類型的生理應(yīng)答等更常見的指標以及因技術(shù)發(fā)展可以檢測的指標。
如果使用細胞治療產(chǎn)品的目的是糾正功能缺陷或受損的細胞或組織的生物學功能，則應(yīng)進行細胞治療產(chǎn)品功能學檢測。如果細胞治療產(chǎn)品的預(yù)期用途是修復/免疫調(diào)節(jié)/替換細胞/組織，并有望能夠終生發(fā)揮功能，則相關(guān)的結(jié)構(gòu)/組織學檢測指標可作為潛在的藥效學標志物而進行檢測，包括鏡檢、組織學檢測、成像技術(shù)或酶活性指標檢測等。
當細胞治療產(chǎn)品包含非細胞成分時，應(yīng)對該產(chǎn)品進行生物相容性、體內(nèi)降解速率和生物學功能等進行綜合評估。
（三）藥代動力學
傳統(tǒng)的藥代動力學研究方法并不適合人的細胞治療產(chǎn)品的藥代動力學研究。應(yīng)盡可能開展細胞治療產(chǎn)品的體內(nèi)過程研究。臨床試驗中應(yīng)對研究要求、可能采取的方法及可行性進行討論，并注意在細胞治療產(chǎn)品預(yù)期的活性過程中，重點檢測細胞的活力、增殖與分化能力、體內(nèi)的分布/遷移和相關(guān)的生物學功能。
如果需對細胞治療產(chǎn)品進行多次（重復）給藥，臨床方案設(shè)計時應(yīng)考慮細胞治療產(chǎn)品在體內(nèi)的預(yù)期存活時間及相應(yīng)的功能。
（四）劑量探索
早期臨床試驗的目的之一是探索細胞治療產(chǎn)品的有效劑量范圍。如可能，還應(yīng)確定最大耐受劑量。
應(yīng)基于在產(chǎn)品的質(zhì)量控制研究和臨床前研究中所獲得的結(jié)果來確定細胞治療產(chǎn)品給藥劑量，并充分考慮產(chǎn)品的生物學效力。
與小分子藥物不同，細胞治療產(chǎn)品的首次人體試驗起始劑量一般難以從傳統(tǒng)的非臨床藥代動力學和藥效學中評估確定，但其既往臨床使用經(jīng)驗（如有）可能有助于合理地確定臨床起始劑量。很多細胞治療產(chǎn)品會長期存在于受試者體內(nèi)或作用時間持久，所以首次人體試驗應(yīng)采用單次給藥方案，只有在初步了解產(chǎn)品的毒性和作用持續(xù)時間之后，才可考慮重復給藥。
細胞治療產(chǎn)品通常采用半對數(shù)遞增（100.5倍）的方法來制定劑量遞增方案。給藥劑量增幅的設(shè)定應(yīng)該考慮到臨床前數(shù)據(jù)中與劑量變化有關(guān)的風險和活性以及現(xiàn)有的任何臨床數(shù)據(jù)。同時應(yīng)充分考慮細胞治療產(chǎn)品特有的安全性風險，設(shè)定足夠的給藥間隔和隨訪時間，以觀察急性和亞急性不良事件。
盡管細胞治療產(chǎn)品的給藥劑量可能取決于患者的個體情況，然而早期臨床試驗所提供的劑量探索研究的證據(jù)仍然是確證性臨床試驗中給藥劑量確定的重要依據(jù)。
（五）臨床有效性
通常，臨床有效性的確證性試驗應(yīng)在目標適應(yīng)癥人群中開展，應(yīng)有足夠樣本量、合理的對照并選擇具有臨床意義的終點指標。同時，該臨床試驗應(yīng)能夠提供可產(chǎn)生預(yù)期治療效果的臨床給藥方案、治療效果的持續(xù)時間以及在目標人群中的獲益與風險。
針對特定適應(yīng)癥的確證性研究應(yīng)符合現(xiàn)有的相關(guān)技術(shù)指導原則。在研究過程中，如果與上述原則有偏離應(yīng)提供合理的解釋。
可以使用以往經(jīng)過驗證或普遍認可的指標作為替代終點，該替代終點應(yīng)具有臨床意義并與治療有效性相關(guān)。如果產(chǎn)品的有效性依賴于該產(chǎn)品需要長期維持輸入細胞的生物學活性，臨床試驗觀察時間應(yīng)按照該產(chǎn)品的預(yù)期生物學活性設(shè)計，并應(yīng)提供長期的患者隨訪計劃。
（六）臨床安全性
細胞治療產(chǎn)品的安全性監(jiān)測應(yīng)貫穿于產(chǎn)品研發(fā)全過程。
應(yīng)對非臨床研究中出現(xiàn)的所有安全性問題進行分析并提出解決措施，尤其是在缺乏相應(yīng)的動物模型進行安全性評估或缺乏同源動物模型來預(yù)測人與動物在生理學存在差異的情況下的安全性評估。
在確定臨床研究方案和患者目標人群時，應(yīng)該將細胞治療作為一個整體進行風險評估，如在實施細胞治療產(chǎn)品所需的手術(shù)或免疫抑制治療等過程中。
早期試驗中，其主要目的是評價安全性。基于風險考慮，應(yīng)在首例受試者安全性盡可能充分暴露后再逐例入組其他受試者。安全性評價的一般性監(jiān)測通常包括癥狀記錄和常規(guī)的臨床檢查，具體的監(jiān)測項目取決于多種因素，如產(chǎn)品的性質(zhì)和作用機制、研究人群、動物研究的結(jié)果和任何相關(guān)的臨床經(jīng)驗。除了針對預(yù)期和非預(yù)期安全性問題的一般性項目檢查和監(jiān)測外，還可以針對細胞治療產(chǎn)品的特定預(yù)期安全性問題進行評估。如急性或遲發(fā)性輸注反應(yīng)、細胞因子釋放綜合征、自身免疫反應(yīng)、移植物失功或細胞治療產(chǎn)品失活、移植物抗宿主反應(yīng)、伴發(fā)惡性疾病、供體傳染性疾病的傳播、病毒重新激活等。申請者應(yīng)該收集臨床試驗中的所有不良事件。
在細胞治療產(chǎn)品的確證性臨床試驗及上市后階段，除一般的癥狀記錄和常規(guī)的臨床檢查外，還應(yīng)注意一些重要生物學過程的改變，包括免疫應(yīng)答、免疫原性、感染以及惡性轉(zhuǎn)化等。
由于細胞治療產(chǎn)品的藥理學活性可能起效緩慢或者延遲，因此，無論受試者是否接受了整個治療方案，都應(yīng)該持續(xù)監(jiān)測安全性和藥理學活性。對于預(yù)期具有長期活性的產(chǎn)品，應(yīng)對患者進行隨訪以確定治療產(chǎn)品的長期有效性及充分暴露產(chǎn)品相關(guān)的安全性問題。隨訪持續(xù)時間應(yīng)能提供初步的有效性證據(jù)和該產(chǎn)品的活性持續(xù)時間，并應(yīng)考慮該產(chǎn)品是否引起遲發(fā)型安全性問題等因素。
基于風險考慮，建議開展重復給藥產(chǎn)品的臨床安全性研究。確定最大安全劑量時應(yīng)該考慮到重復給藥的可能性。
在細胞治療產(chǎn)品臨床試驗中，不良反應(yīng)的頻率或嚴重程度存在相當大的不確定性，因此，臨床試驗方案應(yīng)該包括停止標準，風險評估方案，并成立獨立的數(shù)據(jù)和安全監(jiān)察委員會。
（七）風險管理方案
在制訂風險管理方案時，應(yīng)闡述常規(guī)藥物警戒及產(chǎn)品的可追溯性。同時應(yīng)考慮細胞治療產(chǎn)品在給藥、個體化制備、特殊處理（如有效期短暫）或輔助治療中可能帶來的療效和安全性差異。作為風險管理的一部分，應(yīng)制定規(guī)范可行的標準操作規(guī)程。
細胞治療產(chǎn)品可能需要特定的長期研究來監(jiān)測特定的安全性問題，包括失效。應(yīng)對長期安全性問題，如感染、免疫原性/免疫抑制和惡性轉(zhuǎn)化進行評估。需要有足夠的隨訪時間以評價其安全性。
在現(xiàn)階段，對高風險的細胞治療產(chǎn)品，患者的隨訪時間應(yīng)足夠長，甚至終身隨訪。隨著對細胞治療產(chǎn)品認識的增加，可延長或縮短隨訪間隔時間。
根據(jù)細胞治療產(chǎn)品的生物學特性，可能需要開展特定的流行病學研究。
七、名詞解釋
原材料（Raw materials）：指生產(chǎn)過程中使用的所有生物材料和化學材料，不包括輔料。
生產(chǎn)過程細胞（Ancillary cells）：系指用于制備病毒載體等，起到包裝輔助作用而不回輸給受者的細胞。
細胞批次（Cell batch）：系指取自個體的一次采集的細胞，經(jīng)生產(chǎn)全過程制成的終末細胞培養(yǎng)物或收獲物。
成瘤性（Tumorigenicity）：系指細胞接種動物后在注射部分和（或）轉(zhuǎn)移部位由接種細胞本身形成腫瘤的能力。即接種的細胞自身形成腫瘤的能力。
致瘤性（Oncogenicity）：系指細胞裂解物中的化學物質(zhì)、病毒、病毒核酸或基因以及細胞成分接種動物后，導致被接種動物的正常細胞形成腫瘤的能力。即接種物（細胞和/或裂解物）促使正常細胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤細胞的能力。
